A polimeráz láncreakció (PCR) az egyik legismertebb módszer az élettudományi laboratóriumokban.
A PCR lemezek első osztályú műanyagból készülnek az összegyűjtött minták vagy eredmények kiváló kezeléséhez és elemzéséhez.
Vékony, egyenletes falakkal rendelkeznek, amelyek pontos hőátadást biztosítanak.
A valós idejű alkalmazás előkészítéseként a DNS vagy RNS apró frakcióit izolálják és PCR lemezeken tárolják.
A PCR lemezek nagyon hatékonyak a hőzárásban, és korlátozzák a hőáramlást is.
Mivel azonban a PCR lemezek hatékonyak és megbízhatóak, hajlamosak a hibákra és pontatlanságokra a minták feldolgozása során.
Tehát ha jó minőségű PCR lemezeket szeretne szerezni. A legjobb, ha kapcsolatba lép egy megbízható PCR lemez gyártóval. Ezzel biztos lehet benne, hogy a legjobb árat kapja.
Az alábbiakban felsorolunk néhány óvintézkedést a reagensek vagy a minták szennyeződésének elkerülésére és a pontatlan eredmények elkerülésére.
Fertőtlenítse a környezetet
A szennyeződések miatti helytelen pozitív vagy negatív eredmények kétségbe vonhatják az eredményeket.
A szennyeződések és szennyeződések különböző formákban jelennek meg, például nem rokon DNS-ben vagy kémiai adalékanyagokban, amelyek végső soron csökkentik a reakció hatékonyságát és eredményességét.
Számos módja van a PCR-lemezek szennyezettségének nagymértékű csökkentésének.
A sterilizált szűrőhegyek használata egy másik hasznos módja annak, hogy megakadályozzuk a szennyeződések bejutását a mintába a pipettán keresztül.
Egy teljesen tiszta berendezés, beleértve a pipettákat és az állványokat, kifejezetten a PCR használatához biztosított. Ez garantálja a szennyeződések elhanyagolható mértékű átjutását a laboratóriumba.
Használjon fehérítőt, etanolt a pipettákon, állványokon és padokon a szennyeződések eltávolításához.
A részecskeszennyeződés további csökkentése érdekében minden PCR-reakció számára jelöljön ki fenntartott helyet.
Minden lépésnél használjon tiszta kesztyűt, és gyakran cserélje ki.
PCR lemez
Ellenőrizze a sablon koncentrációját és tisztaságát.
A minták PCR-rel történő elemzéséhez használt padok és berendezések tisztaságát fenn kell tartani. Kritikus a minták tisztaságának ellenőrzése az elemzés és a feldolgozás előtt.
Az analizátor jellemzően figyelembe veszi a DNS-minta koncentrációját és tisztasági szintjét.
A 260 nm/280 nm abszorbancia aránya nem lehet kisebb 1,8-nál. A szennyeződéseket ezután 230 nm és 320 nm közötti hullámhosszon azonosítottuk.
Az egyik példában kaotróp sókat és más szerves vegyületeket detektáltunk 230 nm-es abszorbanciánál. Egyidejűleg detektálja és ellenőrizze a zavarosságot a DNS-mintákban 320 nm-es abszorbancia mellett.
Kerülje a PCR lemezek és termékek túlterhelését
Bár kívánatos több termék egyidejű futtatása, ez a PCR-lemezek keresztszennyeződéséhez vezethet.
A PCR lemezek különböző termékekkel való túlterhelése pazarló és megnehezíti a minták azonosítását.
Vezessen nyilvántartást a PCR-reagensek alikvotjairól
A folyamatos fagyasztási/olvadási ciklusok és az alikvot részek gyakori használata károsíthatja a PCR-reagenseket, az enzimeket és a DNTP-ket az átkristályosítás révén.
Mindig törekedjen a felhasznált alikvotok arányának figyelésére a minták elemzésre való előkészítésekor.
Az előnyben részesített LIMS alkalmasabb a készletek és a fagyasztandó vagy felolvasztandó reagensek és minták mennyiségének ellenőrzésére.
Válassza ki az optimális hőkezelési hőmérsékletet.
A nem megfelelő hőkezelési hőmérséklet megválasztása és használata egy másik módja annak, hogy a PCR eredmények hibákat tartalmaznak.
Néha a válasz nem úgy alakul, ahogy tervezték. Az izzítási hőmérsékletet csökkenteni kell a sikeres reakció elősegítése érdekében.
A hőmérséklet csökkentése azonban növeli a hamis pozitív eredmények és a primer-dimerek esélyét.
A PCR lemezek használatakor fontos megerősíteni az olvadási görbe elemzését, mivel ez jó indikátor a megfelelő lágyítási hőmérséklet kiválasztásához.
Primer tervező szoftver segíti a tervezést, biztosítva a megfelelő hőkezelési hőmérsékletet, közvetlenül csökkentve a PCR lemezek hibáit.
pcr lemez
