Használat után ki kell mosnunk a PCR nyolccsöves készletet. Van néhány módja annak, hogy tisztítsa meg a PCR Octal Kit. Mire kell figyelnem használat közben?
A kísérleti módszer elve: A szilikagél membrán magas sótartalmú körülmények között kötődik a DNS-hez, és alacsony sótartalmú körülmények között elválik a DNS-től. Az alapozókat, a mononukleotidokat, az enzimeket, az ásványi olajat, a sóionokat stb. a DNS-tartalmú mosóoldatban elválasztják egymástól, mivel nem rendelkeznek hasonló tulajdonságokkal, mint a DNS.
Kísérleti anyagok: PCR termékek, reagensek, készletek, PCR tisztítókészletek, műszerek, fogyóeszközök, 96 kútból készült DNS előkészítő lemezek, 96 kút mélykúti lemezek, 96 kútból készült V-alakú lemezek
1. A PCR nyolccsöves gyártó beszél a készlet összetételéről, tárolásáról és stabilitásáról
1. Utasítások, fogyóeszközök: 96 kútBÓL álló DNS előkészítő lemez, 96 kút 1,6 ml mélykút lemez, 96 jól V-alakú lemez.
2. Puffer PCR-A: DNS-kötő oldat. Szobahőmérsékleten szorosan zárva tárolja. Ha csapadék lép fel, 65°C-on meleg fürdőben kell feloldani, és használat előtt szobahőmérsékletre hűteni kell.
3. W2 puffer koncentrátum: távolítsa el a sóoldatot. Használat előtt adjunk hozzá etanolt a palackon megadott térfogathoz, jól keverjük össze, és tároljuk szobahőmérsékleten. 100% etanol vagy 95% abszolút etanol használható.
4. Eluens: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, zárt állapotban, szobahőmérsékleten tárolva.
2. A PCR nyolcsoros csövek gyártója beszél az üzemeltetési lépésekről
A felhasználók választhatnak negatív nyomást vagy centrifugálást.
A. Negatív nyomás módszer
1. Helyesen csatlakoztassa a negatív nyomástartó eszközt, helyezze a 96 kútból álló DNS-előkészítő lemezt a negatív nyomású készülékre; adjunk hozzá 3-szor puffer PCR-A-t a PCR-hez, enzim emésztéshez, enzimcímkézéshez vagy szekvenáló reakcióoldathoz (ha a PCR-A puffer kevesebb, mint 100 μl, adjunk hozzá 100 μl-t); jól keverjük össze, és vigyük át egy 96 jól illeszkedő DNS előkészítő lemezre, kapcsoljuk be és állítsuk be a negatív nyomást -25-30 hüvelyk Hg-ra, és lassan lélegeztesd be az oldatot a lemezbe.
2. Adjunk hozzá 0,3 ml W2 puffert, és szívjuk fel az oldatot. Ugyanilyen módon mossuk kétszer 0,3 ml W2 pufferrel.
Erősítse meg, hogy abszolút etanolt ad hozzá a reagenspalackon lévő W2 pufferkoncentrátum jelzett térfogatához.
3. Tartsa fenn a negatív nyomást, és húzza ki a 96 kútból származó DNS-előkészítő lemezt 10 percig.
4. Őrölje meg a 96 jól illeszkedő DNS-előkészítő lemezt 6-szor a hosszú rostos szöveten úgy, hogy a vízelvezető cső lefelé nézzen.
5. Helyezze a 96 kútból álló DNS-előkészítő lemezt egy 96 kútból álló V-alakú lemezre, adjon hozzá 25-30ul vizet vagy elute-t a membrán közepéhez, és hagyja állni 1 percig szobahőmérsékleten. A DNS-t 3000 x g-os centrifugálással 5 percig eluálták.
B. Centrifugális
1. Adjunk hozzá 3 térfogatú PUFFER PCR-A-t (ha a PCR-A puffer kevesebb, mint 100 μl, adjunk hozzá 100 μl-t) a PCR-hez, az emésztéshez, az enzimcímkézéshez vagy a szekvenálási reakciókhoz; keverjük össze és vigyük át 96 kútból álló DNS-re 96 kútból álló előkészítő lemezben. Helyezzük a DNS-előkészítő lemezt egy 96 kútból álló, 1,6 ml mély kútlemezbe, centrifugáljuk 1000 x g-on 1 percig, és dobjuk ki a szűrletet.
2. Egy 96 jól működő DNS-előkészítő lemezen adjunk hozzá 0,3 ml W2 puffert, centrifugáljuk 1000×g-on 1 percig, és dobjuk ki a szűrletet. 0,3 ml W2 pufferrel mossuk újra ugyanilyen módon. Erősítse meg, hogy abszolút etanolt ad hozzá a reagenspalackon lévő W2 pufferkoncentrátum jelzett térfogatához.
3. Helyezze a 96 kútból álló DNS-előkészítő lemezt egy 96 kútból álló 1,6 ml mélykútlemezbe, és centrifugálja 3000×g-on 10 percig.
4. Helyezze a 96 kútból álló DNS-előkészítő lemezt egy tiszta, 96 kútból álló V-alakú alsó lemezbe, adjon hozzá 25-30ul vizet vagy elute-t a membrán közepéhez, és hagyja állni 1 percig szobahőmérsékleten. A DNS-t 3000 x g-os centrifugálással 5 percig eluálták.
A PCR oktális csőgyártók olyan kérdésekről beszélnek, amelyek figyelmet igényelnek:
1. Az eluens vagy a víz 65 °C-ra történő melegítése segíthet az eluáció hatékonyságának javításában.
2. A DNS-molekulák savasak, ajánlott 2,5 mM Tris-HCl- ben, pH 8,5 eluátumban tárolni.
