A sejttenyésztő lemezeket gyakran használják és fontos fogyóeszközök a sejttenyésztési kísérletekben, mert időt és reagens anyagokat takaríthatnak meg a sejtkísérletekhez, és egyszerre több dinamikus változót is beállíthatnak a megfigyelés és kimutatás megkönnyítése érdekében.
kultúrlemez
1. A 96-os, 24-kút kultúrtányérok vagy Petri-csészék fedele nagyon laza, ami kényelmes a szellőzéshez, de vajon becsúsznak-e baktériumok, penészgombák és egyéb szennyező anyagok is?
Válasz: (1) A borító nagyon laza, és a félig nyitott kultúrához tartozik. Ennek az a célja, hogy lélegezzen (valójában az, hogy a tenyészedényen kívüli CO2 teljes mértékben kicserélődjön a tenyésztálcával a táptalaj pH-értékének fenntartása érdekében).
(2) Vannak előnyei és hátrányai, ami növeli a szennyezés lehetőségét. Ezenkívül ez a Petri-csészében lévő folyadék elpárologtatását okozza, ami figyelemre méltó a gyógyszerek pontos adagolására. Tehát a következő két intézkedésre van szükség:
a) Az inkubátor levegőjének tisztának kell lennie (rendszeres ultraibolya fény, alkoholos súrolás, és az inkubátort a lehető legkevesebbet kell be- és kikapcsolni)
b) Az inkubátorban a páratartalmat mindig 100 százalékon kell tartani (mosogató, amelyben steril desztillált vizet helyeznek az inkubátorba). Ügyeljen az aszeptikus működésre!
2. A sejtjeimet a tenyésztőlemezen oltjuk be, és a sejtek mindig a perifériás részen gyűlnek össze. Mit kellene tennem? Látom, hogy néhány harcostárs sejtjei középen gyűlnek össze. A lemez minőségével van gond?
V: Hogyan kevered a sejteket? Pipettával fújja vagy rázza a kultúrlemezt? Ha ez utóbbi, és körbe rázzuk, akkor nagyon valószínű, hogy a centrifugális erő hatására a sejtek a környező részre kerülnek, ami a cellák közepét eredményezi. Kevesebb, több mint négy hét! Te magad is kipróbálhatod!
Egy jó módszer: mielõtt megművelné a magtányért, tegye be a tányért az inkubátorba néhány órára telítve, majd vegye ki. A sejtek oltásakor az erőnek enyhének kell lennie. Használhat csepegtetőt a tenyésztőlemez lyukának oldalán, lassan Add hozzá, hogy a sejtszuszpenzió a lemez üregeibe áramoljon, és a tenyésztett sejtek lényegében egyenletesen növekedjenek. Ne feledje, hogy soha ne rázza meg az oszcillátort, különben a sejtjei összetapadnak, ahogy mondta.
3. A sejtjeimet normálisan passzálják, de amikor az egyik típus egy hatlyukú lemezre kerül (függetlenül a gyógyszer hozzáadása és a kontrolltól), mindig van két vagy három üreges (véletlenszerű) sejt, amelyek nem növekednek jól, kicsik és látszólag megtörni. Valaki találkozott már ezzel? Mi az ok?
V: Ez összefügghet a hozzáadott folyadék hőmérsékletével. Ha a sejtjeit most vették ki a táptalajcseréhez és a táptalaj hozzáadásához, és hamarosan a 4 fokos hűtőszekrényből is kiveszik a táptalajt, könnyen megfagyhatnak a sejtek. Javasoljuk, hogy először 15 percig inkubálja a táptalajt az inkubátorban.
Emellett a sejtjei növekedési állapotával is összefügg. Az adagolás előtt a sejteket magas szérumkoncentrációkkal lehet inkubálni. Győződjön meg arról, hogy a cellák jó állapotban vannak.
Vagy inkubálható 37-fokos vízfürdőben, vagy magának a tenyésztányérnak a problémája, kipróbálhat másik kultúrtányért. Egy másik lehetőség a sejtállapot-probléma, állítsa be a szérumkoncentrációt a lemez oltásakor.
4. Az elmúlt napokban hatlyukú tenyésztőlemezt használtam a sejtek beoltására. 24 órás tenyésztés után táptalajt cseréltem. A táptalajcsere előtt megfigyeltem, hogy a sejtek a falhoz tapadtak, állapota nagyon jó volt. A táptalaj cseréje után azonnal használtam a mikroszkópot. Megfigyelték, hogy mindegyik lyukban a sejtek csaknem fele halálközeli állapotot mutatott. A sejtek nagyon kicsivé válnak és sok törmeléket termelnek, míg a sejtek másik fele normális, vízválasztó van a rendellenes sejtek és a normál sejtek között, a felső félkör jó, az alsó félkör nem jó, hogyan ez? Mi a helyzet?
V: Megnézheti, hogy az alábbi okok valamelyike fennáll-e
a. A kultúrlemez nincs vízszintesen elhelyezve;
b. Mit szólnál a táptalajhoz, ha a táptalaj lejár, a sejtek nem tapadnak meg. Próbáljon ki egy frissen elkészített táptalajt
c. Lehet, hogy a lemez problémája. Nem probléma más márkájú tányér cseréje vagy kultúrpalack használata.
d. Figyeltél-e a ventilátor befolyására a táptalaj cseréjénél, főleg ha sok a cserére szoruló tenyésztőlemez, könnyen előfordulhat, hogy a sejtek összezsugorodnak és szétrepednek a szél és vízveszteség miatt. Ha igen, akkor a közeget egyenként kell cserélni, és ne félj elpazarolni a pipettát, ügyelj a művelet hatékonyságára!
5. Négy nap telt el azóta, hogy a sejteket megemésztették és beoltották egy 24-lyuklemezre, és minden lyuk középső része mindig tele volt. A tápközeget minden nap mostuk PBS-sel, és ugyanez történt a másnapi táptalajcsere során is. A szélei jó hosszúak és a közepe tele van elhalt sejtekkel?
Válasz: Ha a sejtek körül sűrűn helyezkednek el, középen pedig ritkák, körülbelül a következő okai vannak:
Túl keveset adtak hozzá a táptalajhoz. Főleg a folyadékfeszültség problémája miatt.
Van-e kevesebb víz az inkubátor alján;
A sejtültetés utáni rázás túl sok volt. A sejtek a centrifugális erő hatására szétoszlanak.
A cellák egyenletes eloszlásának kulcsa az, hogy minden cellatípus egyéni különbségeket mutat, és előfordulhat, hogy mások sejtműveletei nem megfelelőek az Ön számára. Tehát egyedül kell felfedeznie, és meg kell találnia a saját sejtjeire egyedi szabályokat. A következő tapasztalatokkal rendelkezik:
(1) Az összes beoltandó sejtszuszpenziót pipettával össze kell keverni a vetés előtt.
(2) A feljegyzések szerint a 24-lyuklemez folyadéktérfogata 1 ml, valójában 1 ml térfogat is elegendő.
(3) Az oltáskor lassan adja hozzá a mintát, és ne felejtse el kissé elforgatni a pipetta hegyét. A mintát nem lehet túl gyorsan hozzáadni, hogy elkerüljük a sejtek felgyülemlését egy mintaadagolási ponton, és ügyeljünk arra, hogy a mintákat különböző részeken adjuk hozzá, vagyis a mozgatható pisztoly hozzáadása közben. Fej, mesterségesen tedd a sejteket egyenletesen elosztva. Ennek eredményeként a sejtek egyenletesen oszlanak el.
