A PCR technológia hasonló a DNS természetes replikációs folyamatához, és specifitása a célszekvencia mindkét végével komplementer oligonukleotid primereken alapul. A PCR három alapvető reakciólépésből áll: denaturáció, annealing és extenzió. Ezt a reakciót a PCR reakciótartályban hajtják végre. A génamplifikációs műszer folyamatos fejlesztésével a reakciótartályban is tapasztalható a centrifugacső fokozatos fejlődése 1,5 ml-ről 0,2 ml-re (0,25 ml) vékony falú {{ 7}},2 ml PCR-hez dedikált. , 0.1 mlpcr cső. A PCR amplifikációs reakciók számának növekedésével fokozatosan kialakulnak a nagy áteresztőképességű génamplifikációs tartályok PCR csíkokhoz és PCR lemezekhez.
A PCR három alapvető reakciólépésből áll: denaturáció-annealing-extension
A templát DNS denaturálása:
Miután a templát DNS-t egy bizonyos ideig körülbelül 94 fokra melegítettük, a templát DNS kettős szálú DNS-e vagy a PCR-amplifikációval létrejött kettős szálú DNS disszociál, így kombinálható a primerrel az előállításhoz. a következő reakciókörhöz.
Templát DNS hűtése (renaturálása) primerekkel:
Miután a templát-DNS-t melegítéssel egyetlen szálrá denaturáltuk, és a hőmérsékletet körülbelül 55 °C-ra csökkentették, a primereket párosítják a templát-DNS egyetlen szálának komplementer szekvenciájával.
Az alapozók kiterjesztése:
A Taq hatására a DNS-templát-primer konjugátum a dNTP-t használja reakció nyersanyagaként egy új, a templát DNS-lánccal komplementer, félig fenntartott replikációs lánc szintéziséhez a bázispárosítás és a félig fenntartott replikáció elve szerint.
A PCR technológia alapelvei
A technológia a DNS polimeráz enzimes szintézisreakcióján alapul templát DNS, primerek és négy dezoxiribonukleotid jelenlétében.
A DNS-polimeráz egyszálú DNS-t használ templátként a szintézis elindításához egy kis darab kétszálú DNS-sel. Egy vagy két szintetikus oligonukleotid primert kombinálnak egy komplementer szekvenciával az egyszálú DNS-templátban, hogy részleges kétszálú DNS-t képezzenek.
Megfelelő hőmérsékleten és környezetben a DNS-polimeráz dezoximononukleotidot ad a primer 3'-OH végéhez, és ezt használja kiindulási pontként a templát 5'→3' irányának meghosszabbításához, hogy egy új DNS-komplementer szálat szintetizáljon.
A különbség a PCR-csövek és a centrifugacsövek között
PCR csövek:
A PCR reakciólemez 96-lyuk vagy 384-lyuk, amelyet kifejezetten szakaszos reakciókhoz terveztek. Az elv az, hogy a PCR-gép és a szekvenszer átbocsátása általában 96 vagy 384.
Centrifuga cső:
A centrifugacső nem feltétlenül PCR-cső. Kapacitásuk szerint sokféle centrifugacső létezik. A leggyakrabban használt 1,5 ml-es, 2 ml-es, 5 ml-es, 15-ös vagy 50 ml-es, a legkisebb (250 ul) pedig PCR-csőként használható.
Hogyan válasszunk PCR csöveket
A PCR-csövek elhelyezése mellett döntöttünk abban a reményben, hogy a hőmérséklet szempontjából a legpontosabb helyet választjuk.
A hőmérséklet legpontosabb pozíciója a modul alatti hőmérséklet-érzékelő feletti pozíció legyen (függetlenül az érzékelő pontatlan hőmérsékletétől).
A különböző PCR műszerek hőmérséklet-érzékelőjének helyzete eltérő.
Például az AB 2720-ban csak egy van középen, az MJ 200-asban három érzékelő van, amelyek bal alsó, középső és jobb felső, Eppendorfé az A vagy H sorban, a Dongshenglong 811 pedig három hőmérséklet-érzékelővel rendelkezik, B{{3} } értéket kell kiválasztani , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, mert ezek a pontok hőmérséklet-pontos pontok.
